1. Utrwalenie w 2-4% aldehydzie glutarowym zbuforowanym 0,2 M. buforem fosforanowym o pH 7,3 przez 8 godzin lub dłużej w temperaturze 4oC;
Bufor 7,3 (na 1000 ml): Roztwór A 115 ml + roztwór B 385 ml + woda 500 ml.
Roztwór A 4,14g NaH2PO4*H2O na 150 ml wody.
Roztwór B 28,68g Na2HPO4*12H2O) na 400 ml wody.
2. Płukanie w buforze fosforanowym pH 7,3 w temperaturze 4oC (3*15 minut).
3. Odwadnianie w szeregu acetonowym:
· aceton w wodzie destylowanej (po 15 minut każde stężenie): 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%;
· aceton cz. d. a. – 30 minut;
· aceton cz. d. a. – 15 minut;
· aceton cz. d. a. + tlenek propylenu (1:1) – 2*15 minut;
4. Płukanie w tlenku propylenu – 2*15 minut;
5. Wysycanie mieszanką eponową w tlenku propylenu z dodatkiem DMP-30:
Mieszanka na epon o średniej twardości:
| |
Dodać
|
Łącznie
|
Dodać
|
Łącznie
|
Dodać
|
Łącznie
|
Dodać
|
Łącznie
|
|
Epon 812
|
9,1
|
9,1
|
18,2
|
18,2
|
20
|
20
|
13,6
|
13,6
|
|
DDSA
|
7,3
|
16,4
|
14,6
|
32,8
|
16
|
36
|
10,9
|
24,5
|
|
MNA
|
3,63
|
20,03
|
7,26
|
40,06
|
8
|
44
|
5,5
|
30
|
|
DNP
|
0,35
|
20,38
|
0,7
|
40,76
|
0,77
|
44,77
|
0,53
|
30,53
|
|
DNP w kroplach
|
12 kropli
|
20,38
|
24 krople
|
40,76
|
26 kropli
|
44,77
|
18 kropli
|
30,53
|
25% mieszanka, proporcje: 5 ml mieszanki eponowej + 15 ml tlenku propylenu (min. 1 godzina)
· 50% mieszanka, proporcje: 10 ml mieszanki eponowej + 10 ml tlenku propylenu (min. 1 godzina)
· 75% mieszanka, proporcje: 15 ml mieszanki eponowej + 5 ml tlenku propylenu (min. 12 godzin)
· 100% mieszanka + 3 krople DMP-30 na każde 5 ml mieszanki eponowej
(24 godziny)
6. Następnie materiał umieszczamy w uprzednio przygotowanych kapsułkach wypełnionych 100% mieszanką eponową i poddajemy polimeryzacji termicznej w temperaturach: 35oC, 45oC i 60oC zmienianych co 24 godziny.
Lepik Haupta
1 g żelatyny, 15 ml gliceryny, ew. 1 g fenolu na 100 ml wody destylowanej. Przechowywać w lodówce.
Barwienie preparatów:
· 0,5% kwas nadjodowy – 1-1,5 godziny;
· woda bieżąca (płukanie) – 5 minut;
· woda destylowana (płukanie) – 3 x 5 minut;
· odczynnik Schiffa – 1-1,5 godziny;
· woda siarkowa (płukanie) – 1-2 minut
· błękit toluidyny – barwienie do 1 minuty;
· płukanie w wodzie destylowanej;
· odwadnianie szeregiem alkoholowym (zanurzyć na chwilę):
alkohol etylowy 40%, 60%, 80%, 100%,
· izopropanol czysty – tu może poleżeć chwilę;
· zatapianie preparatów w euparalu.
Odczynnik Schiffa
0,5 g zasadowej fuksyny, 0,5 g pirosiarczanu sodowego lub potasowego w 100 ml 0,15 n HCl. Zamknąć i odstawić w ciemne miejsce na 24 godziny. Do prawie całkowitego odbarwienia roztworu. Dodać 0,3 g węgla chłonnego, wstrząsać 5 minut, roztwór przesączyć przez bibułę. Przesącz powinien być klarowny i bezbarwny. W razie potrzeby przesączyć raz jeszcze. Przechowywać w lodówce, w ciemności.
Woda siarkowa
5 ml 10% pirosiarczanu sodu lub potasu + 5 ml 1n HCl + 90 ml wody destylowanej. Przygotować bezpośrednio przed użyciem!!!
